-Protocol-

パラフィン包埋材料からの細胞単離方法

１）パラフィンブロックから５０ミクロン程度の厚切りを作成
　　（ドライヤーで熱すると厚切りをやりやすい。）
２）腫瘍部分と実体顕微鏡下で切り出す。
３）数時間かけて十分に脱パラフィン後、再水和する。
　　　（単離がし難いときは、PBSに入れて、６０℃一晩）
４）ハサミやメスで出来るだけ細切する。
５）Protenase K (150 microgram/ml in PBS)を３７℃、３０分間反応。
　　途中で、ピペッティングを何度か行う。
６）氷冷にて反応を止める。
７）ピペッテングして、細胞を浮遊させる。
８）少し静沈し、ゴミを落とし、上澄みを採取する。
　（長く静沈すると細胞も落ちるので、ゴミが落ちる程度で止めること。）
　（濾過用の金網（細胞は通る程度の穴のもの）があればなおよい。）
９）オートスメアーを用いて、コーテングスライドに遠心塗沫する。
　　（８００回転、８分）。
　　　　（適度な細胞密度になるように、PBSで調節すること。）
１０）３０分間、冷風で風乾する。